资料一：犬细小病毒是1978年澳大利亚的Kelly和加拿大的Thomson等同时从患肠炎的病犬粪便中分离获得的，世界各地均有流行，是危害犬类的最主要的烈性传染病之一。该病毒主要感染幼犬，传染性极强，死亡率极高。

一．单克隆抗体

1.制备过程： 

2.单克隆抗体的特点：  

3.单克隆抗体的应用：

思考：如何检查小狗体内有无犬细小病毒？

思考：

如何筛选出杂交瘤细胞？ 

1．已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。

请回答：

（1）若只考虑两两融合，试管中一共有         种细胞。

（2）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂种细胞，并简述原理。

方法：                                                                   。

如何筛选出 能产生特异性抗体的杂交瘤细胞？ 

   经筛选杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞(很多种杂交瘤细胞),需在多孔培养板上分开进行抗体检测和克隆化培养,就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞

  2.现将从预先注射了某种抗原的小鼠脾脏中获得的B淋巴细胞与上述骨髓瘤细胞混合，加入PEG促融后，再加入含氨基嘌呤的培养液。若将这些混合物分装于细胞培养板的小孔中培养（如右图所示），则小孔中的培养物不可能出现的结果是    

A．细胞分裂繁殖，产生抗体，专一性抗体检验呈阴性

B．细胞分裂繁殖，产生抗体，专一性抗体检验呈阳性

C．没有活细胞，产生抗体

D．没有活细胞，不产生抗体

3.要将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到7～10个细胞／ml，每孔滴入     ml细胞稀释液。

A.0.01        B.0.1        C.1       D.10 

资料二：大量制备单克隆抗体的方法主要有两种：

①体外培养法，可获得10μg/mL的抗体；②动物体内诱生法可获得5~20mg/mL的抗体。

4.若要生产大量的接种用的疫苗，你选择的方法是？ 

5.若在犬细小病毒流行时，紧急生产抗体，采用哪种方法？ 

二．动物细胞融合

1.概念：

2.动物细胞融合基本原理：

3.诱导方法：

4.过程:

三．动物细胞培养

1.原理：

2.过程：

3.条件：

思考：根据资料三思考一下，能不能通过其他途径获得单克隆抗体？

资料三：科学家从某些能无限增殖的细胞的细胞质中分离出无限增殖调控基因（prG），该基因能激发许多动物细胞的分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景。 

（1）假如现有下图两种细胞，如何利用移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，试用相关的图示及文字表示该过程：_______________。

四．核移植技术

1.过程：（以多莉为例）

2.原理：

（2）若运用基因工程技术生产单克隆抗体， 可以直接通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，如何进行，简述思路。 

思考：如何检测狗狗体内有没有犬细小病毒?

资料四：犬细小病毒单克隆抗体（CPV McAb）可快速准确的识别犬细小病毒并与犬细小抗原结合形成抗原抗体复合物。从而能够用于快速筛查犬粪便中的犬细小病毒（Canine Parvovirus，CPV） 。

反馈练习：

1.在利用动物细胞融合技术制备单克隆抗体时,不需要考虑  

 A. 选择的小鼠必须是纯种  B. 用同种抗原多次注射小鼠

 C. 细胞融合时加入促融剂  D. 筛选时采用单细胞培养技术 

2.右下图是某动物细胞培养时,培养液中活细胞和死亡细胞密度统计结果。相关叙述不正确的是

A. 培养第6 d时,新产生的细胞数等于死亡细胞数

B. 培养液中应适当加入青霉素、链霉素,以避免杂菌污染

C. 曲线bc段产生的主要原因是培养液中营养物质不足及

有害代谢产物积累等

D. 实验中要控制胰蛋白酶溶液浓度和处理时间,以免损伤细胞

3. 核苷酸合成有两个途径，物质A可以阻断其中的全合成途径 (如下图)。正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶， 制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞中缺乏转化酶。现用加入 H、A、T三种物质的“HAT培养基”来筛选特定的杂交瘤细胞。 关于筛选原理的叙述，正确的是

A.免疫的B细胞及其互相融合细胞因全合成途径被A阻断而在HAT培养基上不能增殖 

B. 骨髓瘤细胞及其互相融合细胞因无法进行上述两个途径而在HAT培养基上不能增殖 

C. 杂交瘤细胞因为可以进行上述两个途径所以能在HAT培养基上大量增殖 

D. HAT培养基上筛选出的所有杂交瘤细胞既能大量增殖又能产生高纯度的目标抗体 

4. 下列有关单克隆抗体制备的叙述，正确的是 

 A. 先利用特定的抗原蛋白饲喂小鼠，再从小鼠脾脏 中分离出B淋巴细胞 

 B. 体外培养杂交瘤细胞需要在培养液中添加动物血清 和一些抗生素

 C. 为避免病毒感染，需用聚乙二醇诱导骨髓瘤细胞和 B淋巴细胞融合 

 D. 单克隆抗体制备技术和植物体细胞杂交技术均依据 细胞的全能性原理

5.下图所示为人类“治疗性克隆”的大致过程。请据图作答：

(1)过程A是目前实现体细胞克隆的关键技术，该技术的主要操作是应用患者________细胞作为核供体，由[　 ]________细胞提供细胞质，进行人工重组。

(2)“治疗性克隆”的结果说明高度分化的体细胞的核仍然具有_______。相同的胚胎干细胞能“克隆”出神经细胞、血细胞、肌肉细胞，“克隆”结果多种多样的根本原因是_________的结果。

(3)若应用转基因技术治疗遗传性糖尿病，则将健康人的控制胰岛素合成的基因导人的受体细胞，是取自通过B得到的结构中的[ 　]________。原因是这些细胞______________。将胰岛素基因导入该细胞通常采用的方法是显微注射法，而将目的基因导入植物细胞采用最多的是__________。

(4)在细胞培养过程中往往会发生细胞接触抑制现象，为了将其分散成单个细胞，通常用_________进行处理。

6. 科学研究发现:用人的体细胞与小鼠体细胞进行融合得到的杂种细胞,在持续分裂过程中鼠的染色体能得以保留而人类染色体则会逐渐丢失,最后只剩一条或几条。下页图表示人的缺乏HGPRT酶突变细胞株(HGPRT^-)和小鼠的缺乏TK酶细胞株(TK^-)融合后并在HAT培养液中培养的过程,结果表明最终人的染色体在融合细胞中仅存有3号染色体或17号染色体或两者都有。已知只有同时具有HGPRT酶和TK酶的融合细胞才可在HAT培养液中长期存活与繁殖。下列相关叙述正确的是

A. 从培养过程看,HAT培养液只是为了筛选杂种细胞

B. 从图示结果看,可以确定人的TK酶基因位于17号染色体

C. 该方法可以对鼠基因定位,小鼠的HGPRT酶位于3号染色体

D. 过程②中为了防止细菌的污染,所用培养液应该添加一定量的干扰素